食品和飼料中三聚氰胺檢測方法有哪些？
2三聚氰胺的檢測方法
三鹿奶粉事件后，我國迅速出臺(tái)了奶粉和飼料中的三聚氰胺檢測方法，《GBT22388-2008原料乳及乳制品中三聚氰胺檢測方法》和《NYT1372—2007飼料中三聚氰胺的測定》。實(shí)際檢測中發(fā)現(xiàn)某些樣品雖然沒有檢出三聚氰胺，但可以發(fā)現(xiàn)其類似物。我國只檢測三聚氰胺，而美國、日本等國要求同時(shí)檢測三聚氰胺及其同系物。胺和酸為二類化合物，很難同時(shí)分析，二次檢測成本和時(shí)間不容許。美國FDA采用ZIC-HILIC色譜柱pH梯度和濃度梯度LC-MS法實(shí)現(xiàn)了二者的同時(shí)檢測。到目前為止，三聚氰胺的檢測方法有傳統(tǒng)的苦味酸法和升華法，還有電位滴定法、色譜法、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、酶聯(lián)免疫法、毛細(xì)管電泳法、近紅外吸收法等。
2.1苦味酸法與升華法
苦味酸法三聚氰胺完全升華后，稱其殘?jiān)�，即測得三聚氰胺純度。這兩種方法準(zhǔn)確度均較高，且對(duì)儀器要求較低，但操作繁瑣，分析時(shí)間太長，不適合于生產(chǎn)中間控制分析中測定溶液中三聚氰胺的含量。
2.2電位滴定法
電位滴定法原理是先測定三聚氰胺溶液中總固體的含量，用硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定熱溶液至pH為5，流水冷卻溶液至室溫，滴定直至pH為3。根據(jù)消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積計(jì)算結(jié)果。該法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，但不適于現(xiàn)場和多個(gè)樣品的檢測。食品基質(zhì)中化學(xué)組成比較復(fù)雜，運(yùn)用此法時(shí)準(zhǔn)確度會(huì)受到影響。陳一虎對(duì)同一試樣進(jìn)行多次平行測定，測定結(jié)果的變異系數(shù)為0.98%，在試樣中加入標(biāo)準(zhǔn)樣品0.12500g進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，回收率在89.28%至93.80%之間。
2.3試劑盒檢測法(酶聯(lián)免疫法，ELISA)
ELISA是用三聚氰胺HRP酶耦合物作為標(biāo)準(zhǔn)品，與樣品中萃取的三聚氰胺同時(shí)放入多孔試劑板上。經(jīng)過30min的培養(yǎng)，樣品中的三聚氰胺和三聚氰胺HRP酶耦合物與三聚氰胺抗體競爭性結(jié)合。經(jīng)過這30min的培養(yǎng)，任何沒有結(jié)合的三聚氰胺和三聚氰胺HRP酶耦合物將被沖洗掉，顯色酶底物加入微孔中，任何結(jié)合的酶耦合物都會(huì)使液體呈現(xiàn)藍(lán)色。等反應(yīng)結(jié)束后，用酶標(biāo)儀讀數(shù)，再將未知樣品的讀數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)比較，就能得出樣品中的三聚氰胺濃度。酶聯(lián)免疫法可以滿足日常食品衛(wèi)生執(zhí)法中檢測三聚氰胺項(xiàng)目的要求，具有低成本、高通量檢測三聚氰胺項(xiàng)目的優(yōu)勢，每次能檢測多個(gè)樣品，這是其他三聚氰胺檢測方法所無法比擬的，而且不需要非常昂貴、復(fù)雜的儀器，樣品制備過程簡捷，技術(shù)操作方便，檢測時(shí)間不超過2h，檢測范圍為20～500ng/mL。但是檢測樣品中如果存在與三聚氰胺類似的物質(zhì)，則有可能會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需要采用HPLC、HPLC-MS、GC-MS方法做進(jìn)一步的精確分析。目前，進(jìn)口的三聚氰胺ELISA檢測試劑盒，有BeaconAnalyticalSystems公司的BeaconMelaminePlateKit、Abraxis公司的MelaminePlatekit、StrategicDiagnostics公司的EnviroGardTriazinePlatekit等。國產(chǎn)的三聚氰胺ELISA檢測試劑盒有中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所開發(fā)的檢測三聚氰胺的酶聯(lián)免疫試劑盒等。
2.4液相色譜檢測法
液相色譜法可對(duì)食品和飼料中三聚氰胺進(jìn)行定性和定量分析，具有操作簡單、靈敏度高，測定周期短等優(yōu)點(diǎn)。陳垂鳳用高效液相色譜法建立了乳制品中三聚氰胺的檢測方法。采用XBP-C8柱(250.0mm×4.6mm，5.0μm)，流速為1.0mL/min，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為20μL，流動(dòng)相為檸檬酸+辛烷磺酸鈉+乙腈+堿性水(25.000%～28.000%的NH3•H2O調(diào)pH為3.0)。測定線性范圍為2.00～10.00mg/kg。
吳彩梅等建立采用固相萃取凈化，高效液相色譜法測定雞蛋中三聚氰胺含量的方法。樣品采用三氯乙酸和乙酸鉛溶液提取，經(jīng)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定樣品提取20min，采用C-C18(4.6mm×
150mm，5μm)色譜柱和PCX固相萃取柱。采用紫外檢測器，檢測波長為240nm，流動(dòng)相為乙腈:辛烷磺酸鈉-檸檬酸緩沖液(10:90，v/v)，流速1.0mL/min，進(jìn)樣量20μL，外標(biāo)法定量。三聚氰胺在1～50μg/mL范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系，在添加質(zhì)量濃度為5～20mg/kg范圍內(nèi)，三聚氰胺添加回收率在72.8%～87.6%，RSD(n=6)為1.5%～4.0%，最低檢測限為0.54mg/kg。