2013-09-2015-06,華中農(nóng)業(yè)大學(xué),預(yù)防獸醫(yī)專業(yè),碩士
2013.07-2014.03 豬肺炎支原體P36蛋白單克隆抗體的制備及鑒定
將pET-28a(+)-P36成功轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)，優(yōu)化表達(dá)條件以可溶性形式高效表達(dá)；使用AKTA FPLC（Amersham Biosciences UPC-900）快速純化液相色譜系統(tǒng)對蛋白進(jìn)行Ni柱親和純化；復(fù)蘇培養(yǎng)Mhp168株F109代，進(jìn)行CCU測定，制備Mhp全菌蛋白用于后續(xù)單抗篩選與驗(yàn)證；通過免疫小鼠、細(xì)胞融合、有限稀釋法克隆陽性細(xì)胞孔、Western blot驗(yàn)證特異性得獲得雜交瘤細(xì)胞株；采用辛酸-飽和硫酸銨沉淀法對在小鼠體內(nèi)誘生的腹水進(jìn)行純化，獲得4株高效價高純度的單抗。
2014.03-2014.05 建立豬肺炎支原體雙抗體夾心ELISA與熒光定量PCR檢測方法
HRP酶標(biāo)單抗，使用Mhp全菌蛋白建立優(yōu)化雙抗體夾心ELISA，但無法檢測到臨床鼻拭子樣品中的Mhp；設(shè)計(jì)Mhp P36基因的熒光定量引物和探針，成功建立FQ-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線，但敏感性不高，課題中斷。
2014.06-2015.03 按照新獸藥申請材料開展豬肺炎支原體間接ELISA檢測試劑盒的研發(fā)
成功表達(dá)純化多批Mhp的三聯(lián)融合蛋白，用作包被抗原建立間接ELISA，增加檢測方法的敏感性；摸索ELISA方法的最佳反應(yīng)條件，判定陰陽性界值，評價方法的特異性、敏感性、重復(fù)性和穩(wěn)定性；將所建立的ELISA方法與IDEXX試劑盒共同檢測大量臨床血清樣品，結(jié)果符合率高。
2008-09-2013-06,華中農(nóng)業(yè)大學(xué),動物醫(yī)學(xué)專業(yè),本科
2012.11-2013.04 豬圓環(huán)病毒2型 ORF2基因在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)及其優(yōu)化
PCR擴(kuò)增ORF2基因，成功構(gòu)建pVL1392-ORF2表達(dá)質(zhì)粒；熟悉掌握Sf9昆蟲細(xì)胞的傳代培養(yǎng)；將表達(dá)質(zhì)粒與線性化桿狀病毒DNA共轉(zhuǎn)染Sf9，經(jīng)多次擴(kuò)增獲得高滴度的重組病毒；Western blot檢測不同感染復(fù)數(shù)下細(xì)胞培養(yǎng)液上清和細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)量。
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