2.2 以檢測(cè)DNA 為基礎(chǔ)的方法
    以DNA為基礎(chǔ)的檢測(cè)技術(shù)主要有核酸探針雜交、DNA指紋分析、PCR-RELP分析、PCR特異擴(kuò)增(常規(guī)PCR方法和Real-timePCR方法)。主要原理都是對(duì)各種物種內(nèi)特異的核酸序列進(jìn)行提取、鑒定，從而判定飼料內(nèi)有無該物種的成分。其中PCR特異擴(kuò)增方法由于其簡(jiǎn)單、快速、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，成為目前最廣泛應(yīng)用的方法，特別是熒光PCR的應(yīng)用使得檢測(cè)的特異性和敏感性更高。我國(guó)也于2008年4月1日頒布實(shí)施了應(yīng)用PCR方法定性檢測(cè)動(dòng)物源性飼料中動(dòng)物成分的標(biāo)準(zhǔn)，包括駱駝源性成分、狗源性成分、哺乳動(dòng)物源性成分、豬源性成分、兔源性成分、鹿源性成分和馬、驢源性成分的PCR定性檢測(cè)，為進(jìn)一步規(guī)范和監(jiān)督動(dòng)物源性飼料的安全使用提供技術(shù)支持。
    Cawthraw等(2009)應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR測(cè)定動(dòng)物飼料中禁用的哺乳類及禽類成分，飼料中含有1%的肉骨粉時(shí)檢測(cè)其中的16SrRNA可以進(jìn)行鑒別。用mtATP6作為靶序列，應(yīng)用PCR探針技術(shù)檢測(cè)飼料中的豬源成分，以PPA8和PPA6作為檢測(cè)DNA，檢出限可以分別達(dá)到0.01%和0.001%，這種方法已經(jīng)在日本的飼料檢測(cè)中應(yīng)用(Shinoda等，2008；Yoshida等，2009)。
2.3 微生物的檢測(cè)
    飼料中污染微生物的危害主要產(chǎn)生在以下四個(gè)方面，一是含有致病性微生物如沙門氏菌、志賀氏菌、致病性大腸桿菌等而使動(dòng)物產(chǎn)生疾��；二是微生物的繁殖使某些營(yíng)養(yǎng)成分如脂肪、動(dòng)物蛋白產(chǎn)生腐敗作用；三是非致病性微生物寄生于飼料中，消耗飼料中的養(yǎng)分，使飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值下降；四是某些微生物會(huì)產(chǎn)生毒素如黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、肉毒毒素、金黃色葡萄球菌腸毒素等，動(dòng)物食用含有這些毒素的飼料后會(huì)產(chǎn)生危害。目前微生物的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展很快，利用了包括微生物學(xué)、分子化學(xué)、生物化學(xué)、生物物理、免疫學(xué)和血清學(xué)等領(lǐng)域的知識(shí)，其目的是建立可用于微生物計(jì)數(shù)、早期診斷、鑒定等方面的快速檢測(cè)技術(shù)。除常規(guī)的平板培養(yǎng)外，目前已有商品化的基因探針試劑盒，如GENE-TRAKSystemsDNA雜交篩選法(AOAC方法：987.10，990.13)。李斯特氏菌、沙門氏菌、彎曲桿菌等均有DNA探針的試劑盒。目前，已經(jīng)有了全自動(dòng)化的PCR檢測(cè)試劑盒及儀器，如美國(guó)杜邦快立康公司的BAX病原菌檢測(cè)系統(tǒng)�？捎糜跈z測(cè)沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7等致病菌。熒光酶免疫分析篩選方法是在EIA基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記的酶底物，用熒光計(jì)檢測(cè)熒光度值來判斷結(jié)果。如沙門氏菌熒光酶免疫分析研究篩選方法是基于EIA測(cè)定沙門氏菌抗原。沙門氏菌多克隆免疫色度分析篩選方法已有許多試劑盒，由澳大利亞BioenterrisesPtyLtd和美國(guó)BioControlSystems，Inc研制的多克隆免疫試劑盒，都已獲AOAC認(rèn)可。Koyuncu等(2010)建立了以PCR為基礎(chǔ)的商業(yè)化沙門氏菌enterica檢測(cè)，當(dāng)每25g飼料中含有1個(gè)沙門氏菌enterica時(shí)的檢測(cè)結(jié)果與培養(yǎng)法相近，該方法與平板培養(yǎng)的靈敏度及專屬性基本一致。但也會(huì)有一些PCR檢測(cè)陽性的飼料中并不能分離出沙門氏菌，因此PCR方法目前還不能完全替代平板培養(yǎng)法，但可以用來進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查研究的方法。

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